HomeHelixbook Virus del Papiloma Humano de alto riesgo cancerígeno (tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68), cuantificación de ADN, cribado para determinar la posibilidad de integración del virus en el genoma [tiempo real -PCR]
Virus del papiloma humano de alto riesgo cancerígeno (tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68), cuantificación de ADN, cribado para determinar la posibilidad de integración del virus en el genoma [PCR en tiempo real]
El estudio se utiliza para diagnosticar la infección por el virus del papiloma y, al mismo tiempo, determinar la cantidad de ADN viral en el material de prueba. El análisis permite sacar una conclusión sobre el grado de daño de la mucosa, para evaluar la efectividad de la terapia en el curso del tratamiento. La cantidad total de ADN de 14 tipos de VPH de alto riesgo carcinogénico (HCR) se determina con una determinación separada del ADN de VPH de los genotipos 16, 18 y 45. La prueba también permite evaluar la probabilidad de integración de los tipos de VPH 16, 18 y 45 en el genoma humano (que es un factor pronóstico peligroso y desfavorable).
sinónimos rusos
Papilomavirus de alto riesgo cancerígeno, Papilomavirus de alto riesgo cancerígeno, VPH de alto riesgo cancerígeno.
sinónimos en inglés
Virus del Papiloma Humano, ADN; VPH, Carga Viral.
Método de investigación
Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real.
¿Qué biomaterial se puede utilizar para la investigación?
¿Cómo prepararse adecuadamente para el estudio?
- Para las mujeres, se recomienda realizar el estudio antes de la menstruación o 2-3 días después de que termine.
- Los hombres no deben orinar durante 3 horas antes de tomar una muestra urogenital.
Información general sobre el estudio
Los virus del papiloma humano (VPH) son un grupo extenso y variable de virus que infectan el epitelio de la piel y las membranas mucosas y tienen potencial oncogénico. El VPH se transmite por contacto estrecho con un epitelio infectado, por lo que las principales vías de contagio son la sexual y el contacto-doméstico. El VPH puede transmitirse de una madre infectada a su feto.
Los factores que provocan el desarrollo de la infección por VPH incluyen el inicio más temprano de la actividad sexual, un gran número de parejas sexuales, inmunidad reducida, el uso de anticonceptivos orales, beriberi, infecciones de transmisión sexual, tabaquismo y vivir en grandes ciudades.
El período de incubación puede durar de 2 meses a 2-10 años. Es característico un curso latente de la enfermedad, en el que no hay manifestaciones clínicas, y se revela una norma durante el examen colposcópico, citológico e histológico. En el 30% de los casos, el virus puede eliminarse en un plazo de 6 a 12 meses. El diagnóstico de infección latente por VPH se realiza únicamente mediante PCR.
El VPH puede afectar el epitelio de diferentes maneras: contribuir a la aparición de formaciones benignas (papilomas, condilomas) o la combinación del ADN del virus del papiloma con el genoma celular, lo que conduce a la displasia (neoplasia) y más tarde al cáncer (más a menudo en la zona de transición). del cuello uterino).
Los virus del papiloma de alto riesgo oncogénico incluyen los tipos de VPH 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Para identificar el patógeno, se utiliza el método de reacción en cadena de la polimerasa, que le permite detectar el ADN del virus. El principio del método se basa en un aumento múltiple en el número de copias de un segmento de ADN específico para un patógeno dado.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método de diagnóstico molecular que permite identificar el material genético del patógeno en las primeras etapas de la enfermedad. Se caracteriza por altos índices de sensibilidad y especificidad diagnóstica, rapidez en la obtención del resultado final y accesibilidad. Una característica del método es la capacidad de detectar el ADN del virus incluso con un pequeño contenido del mismo en el material biológico en estudio. El método se basa en un aumento múltiple en el número de copias de una región de ADN específica de un patógeno determinado. Para el diagnóstico se puede utilizar una variedad de material biológico tomado de niños, adultos, personas con patologías del sistema inmunológico y mujeres embarazadas. El método permite determinar la cantidad de moléculas de ADN del virus estudiado, lo cual es importante para diagnosticar una forma aguda de infección, reactivar una infección persistente, portar un virus y también monitorear la efectividad de la terapia antiviral en curso.
Según estudios, cuantitativo el contenido del virus en el material se correlaciona con el grado de neoplasia: cuanto mayor es la carga viral, más pronunciados son los cambios citológicos en el epitelio. Al examinar, es necesario tener en cuenta el genotipo del virus, la presencia y el grado de cambios citológicos e histológicos en los tejidos, un aumento o disminución de la carga viral varios meses (6 meses o más) después del examen anterior.
En el estudio, la cantidad total de ADN de 14 tipos de VPH de alto riesgo carcinogénico (HRC) se determina con una determinación separada de ADN de VPH de 16, 18 y 45 genotipos. HPV HRC es la principal causa etiológica del desarrollo del cáncer de cuello uterino y su displasia severa precedente. El VPH se encuentra en el 95% de los casos de cáncer de cuello uterino, de los cuales 16, 18, 45 genotipos juntos son la causa del 75% de los carcinomas de células escamosas y del 94% de los adenocarcinomas de cuello uterino.
Se sabe que el desarrollo del cáncer de cuello uterino a menudo se asocia con la integración del ADN viral en el genoma de la célula huésped. En la mayoría de los casos, los genotipos 16 y 18 del VPH están integrados, mientras que la sección E1/E2 se rompe mientras se mantiene el oncogén E6/E7. En el sistema de prueba sobre el que se realiza este estudio, se detectan diferentes partes del genoma de los tipos 16, 18 y 45 del VPH a través de diferentes canales del dispositivo. La detección de la región E6 en ausencia de la región E1/E2 permite juzgar indirectamente la posibilidad de integración del virus en el genoma humano. Si se detecta la posibilidad de integrar el virus en el genoma, se muestra la información correspondiente en el formulario de respuesta.
¿Para qué sirve la investigación?
- Evaluar el riesgo de desarrollar neoplasias asociadas al VPH (cáncer de cuello uterino, cáncer de recto, cáncer de la región anogenital y otras localizaciones).
- Monitorizar la eficacia del tratamiento de enfermedades precancerosas asociadas al VPH.
- Para monitorear la infección por virus del papiloma y predecir su curso.
¿Cuándo está programado el estudio?
- Cuando se detectan cambios citológicos en un frotis de atipia, en un Papanicolaou, en una preparación histológica.
- Con condilomas y otros cambios morfológicos en el tracto genital.
- Cuando se realiza la detección del cáncer de cuello uterino en mujeres mayores de 25 a 30 años (como estudio adicional).
- Al monitorear el VPH infectado.
- En el tratamiento del cáncer y condiciones precancerosas asociadas con el VPH.
¿Qué significan los resultados?
El nivel de carga viral se interpreta teniendo en cuenta los resultados del examen citológico de frotis, los cambios histológicos en la biopsia y el genotipo del virus, y los cambios en su cantidad a lo largo del tiempo.
- La cantidad de ADN del VPH no se determina en ausencia del virus en la muestra de prueba o su cantidad mínima (por debajo del nivel detectable): el riesgo de desarrollar un proceso patológico asociado con el VPH es mínimo.
- Concentración clínicamente insignificante del virus (menos de 10 3 copias de ADN de VPH por 10 5 células): riesgo mínimo de desarrollar displasia, curso transitorio del proceso viral.
- Una concentración clínicamente significativa del virus (más de 10 3 copias de ADN de VPH por 10 5 células) es una infección crónica con un alto riesgo de desarrollar displasia y cáncer de cuello uterino.
- Más de 10 5 copias de ADN del VPH por cada 10 5 células con un hecho establecido de infección persistente (VPH detectado durante más de 1 año): un aumento de la carga viral asociado con un mayor riesgo de displasia grave, a menudo ocurre en el cáncer de cuello uterino.
- Una disminución de 10 veces en la carga viral en 6 meses es una infección transitoria.
- Un aumento en la carga viral 6 meses o más después del tratamiento indica la posibilidad de una recaída.
Avisos importantes
- La infección por VPH no siempre conduce al cáncer de cuello uterino.
- Es posible la infección simultánea con varios genotipos de VPH.
- El resultado del análisis debe interpretarse teniendo en cuenta las conclusiones de los estudios citológicos e histológicos.
También recomendado
¿Quién ordena el estudio?
Obstetra-ginecólogo, dermatovenereólogo, urólogo, infectólogo, proctólogo, pediatra, otorrinolaringólogo.
Cáncer cervicouterino / Virus del papiloma humano / carga cuantitativa / Integración / expresión / Pronóstico
Resumen del artículo científico sobre medicina clínica, autor del artículo científico — Kiseleva V. I., Krikunova L. I., Lyubina L. V., Mkrtchyan L. S., Bezyayeva G. P.
En raspados del canal cervical y biopsias tumorales de 64 pacientes con cáncer de cuello uterino (con virus del papiloma humano primario tipo 16 verificado histológicamente) previo al tratamiento por PCR en tiempo real, la carga cuantitativa, el estado físico del virus y la expresión de la E7 se estudiaron los oncogenes virales. En el grupo de pacientes con ADN de VPH integrado se demostró que a mayor grado de integración del virus, menor su carga cuantitativa, mayor expresión del oncogén viral E7 y menor frecuencia de supervivencia libre de recaídas. pacientes En el grupo de ADN episomal del VPH, no se observó correlación entre la carga viral ni con la expresión de E7 (R=-0,36, p=0,34, n=9) ni con la supervivencia del paciente. Se supone que la carga viral en tumores con ADN de VPH 16 integrado puede reflejar indirectamente la gravedad del pronóstico del cáncer de cuello uterino.
Temas relacionados de artículos científicos en medicina clínica, autor del artículo científico: Kiseleva V. I., Krikunova L. I., Lyubina L. V., Mkrtchyan L. S., Bezyaeva G. P.
Formas integrativas y episomales del genotipo 16 del virus del papiloma humano en la neoplasia intraepitelial cervical y el cáncer de cuello uterino
Determinación de la carga viral y estado del ADN del virus del papiloma humano tipo 16 mediante PCR en tiempo real
Detección de virus del papiloma humano de alto riesgo cancerígeno y evaluación del estado físico del ADN viral por el método de reacción en cadena de la polimerasa en lesiones del epitelio cervical
Marcadores del inicio y la progresión de la neoplasia intraepitelial cervical asociados a la infección por el virus del papiloma humano: de los avances científicos a la práctica clínica
La carga cuantitativa, el estado físico del virus del papiloma humano (VPH) 16 y la expresión del oncogén viral E7 se examinaron mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en raspados endoservicales y material de biopsia tomado en 64 pacientes con cáncer de cuello uterino positivo para VPH 16 primario verificado histológicamente en estadios I- IV antes del tratamiento. Se demostró que en pacientes con ADN de VPH integrado, a mayor grado de integración del virus, menor carga cuantitativa y mayor expresión del oncogén viral E7 y peor pronóstico de cáncer de cérvix . No se observó correlación entre la carga viral y la expresión de E7 (R = -0.36, p = 0.34, n = 9) o la supervivencia de los pacientes en el grupo con ADN de VPH episomal. Se espera que la carga viral en tumores con ADN de VPH 16 integrado pueda reflejar indirectamente el pronóstico de la gravedad de la enfermedad.
Carga cuantitativa del virus del papiloma humano tipo 16 y predicción de la efectividad del tratamiento del cáncer de cuello uterino
Carga cuantitativa del virus del papiloma humano tipo 16 y predicción de la eficacia del tratamiento del cáncer de cuello uterino
Kiseleva V.I., Krikunova L.I., Lyubina L.V., Mkrtchyan L.S., Bezyaeva G.P.,
Panarina L.V., Skogarev S.A., Kuevda D.A.1, Trofimova O.V.1, Saenko A.S.
FGBU MRRC del Ministerio de Salud y Desarrollo Social de Rusia, Obninsk;
1 Instituto Central de Investigación de Epidemiología de Rospotrebnadzor de Rusia, Moscú
En raspados del canal cervical y biopsias tumorales de 64 pacientes con cáncer de cuello uterino (con virus del papiloma humano primario tipo 16 verificado histológicamente) antes del tratamiento por PCR en tiempo real, la carga cuantitativa, el estado físico del virus y la expresión de la E7 se estudiaron los oncogenes virales. En el grupo de pacientes con ADN VPH integrado se demostró que a mayor grado de integración del virus, menor su carga cuantitativa, mayor expresión del oncogén viral E7, y menor frecuencia de supervivencia libre de recaídas. de pacientes En el grupo de ADN episomal del VPH, no se observó correlación entre la carga viral ni con la expresión de E7 (R=-0,36, p=0,34, n=9) ni con la supervivencia del paciente. Se supone que la carga viral en tumores con ADN de VPH 16 integrado puede reflejar indirectamente la gravedad del pronóstico del cáncer de cuello uterino.
Palabras clave: cáncer de cuello uterino, virus del papiloma humano, carga cuantitativa, integración, expresión, pronóstico.
Actualmente, el papel etiológico del virus del papiloma humano (VPH) de alto riesgo carcinogénico (HRC) en la carcinogénesis del cáncer de cuello uterino (CC) ha sido convincentemente probado. Varios estudios han demostrado que la persistencia de un virus con una alta carga puede contribuir a la rápida progresión de células citológicamente normales del cuello uterino a células displásicas y luego a células tumorales [2, 4, 8, 9, 14, 16] . Aún no se ha determinado definitivamente el papel de la carga cuantitativa de HRC HPV en la predicción del curso del cáncer de cuello uterino que ya ha tenido lugar. Según algunos autores, a mayor carga viral, mejor evolución clínica de la enfermedad [5, 13]. Según otros datos, la carga viral no importa para el pronóstico, solo la expresión del virus es significativa [3]. El objetivo de este estudio fue estudiar la posible relación entre el número de copias de ADN del VPH 16 y la expresión del oncogén viral E7 en pacientes con cáncer de cérvix y la importancia de la carga viral en el pronóstico de esta enfermedad.
materiales y métodos
El grupo de estudio consistió en 64 pacientes con cáncer de cuello uterino positivo para VPH 16 verificado histológicamente. La extensión del proceso tumoral se evaluó durante un examen completo utilizando el método de investigación de ultrasonido (ultrasonido) con mapeo Doppler, tomografía computarizada (TC) e imágenes por resonancia magnética (IRM). El principal método de tratamiento fue la radioterapia combinada. Los pacientes con formas localmente avanzadas de la enfermedad se sometieron a quimiorradioterapia, que incluía radioterapia combinada en
Kiseleva V.I.* – investigadora líder, Ph.D.; Krikunova L. I. – cabeza. departamento, MD, prof.; Liubina L.V. – investigador principal, doctorado; Mkrtchyan L. S. – investigador principal, doctorado; Bezyaeva G.P. – n.s.; Panarina L. V. – n.s.; Skugarev S.A. – oncólogo; Saenko A.S. – Diputado director científico trabajo, MD, prof. Institución Presupuestaria del Estado Federal MRRC del Ministerio de Salud y Desarrollo Social de Rusia. Kuevda D.A. – Diputado jefe del departamento de segun cientifico trabajar; Trofimova V.O. – científico colaborador FGUN Instituto Central de Investigación de Epidemiología de Rospotrebnadzor de Rusia.
‘Contactos: 249036, región de Kaluga, Obninsk, st. Koroleva, 4. Tel.: (48439) 9-72-77; correo electrónico: vaivki@mrrc.obninsk.ru.
en el contexto de 3 ciclos de poliquimioterapia normodosa con preparaciones de platino y fluorouracilo. La eficacia de la terapia se evaluó por el grado de regresión del tumor 3 meses después del final del ciclo de tratamiento.
La presencia de ADN del VPH se investigó antes del tratamiento en raspados de células epiteliales del canal cervical y de la superficie externa del cuello uterino (CC), así como en las biopsias tumorales correspondientes. El aislamiento de ADN se llevó a cabo por el método sorbente utilizando kits DNA-sorb B para raspados y kits DNA-sorb C para muestras de biopsia (FGUN Instituto Central de Investigación de Epidemiología de Rospotrebnadzor de Rusia – FGUN TsNIIE). El análisis de la carga cuantitativa, el estado físico del ADN del VPH 16 y la expresión del oncogén viral E7 se realizó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real en iCycler iQ (BioRad, Alemania) y Rotor Gene (Corbett Research, Australia ). ). En un tubo se amplificaron fragmentos de los genes E2 y E7 del virus y el gen de la p-globina. El grado de integración se evaluó mediante la relación del número de E7/E2 (E7 se integra, E2 no se integra en el genoma) utilizando nuestro algoritmo, teniendo en cuenta la desviación estándar y el coeficiente de variación. La carga viral se determinó por el número de copias del gen E7 por 105 células. El nivel de expresión del oncogén viral E7 se evaluó por el número de transcritos de ARNm después de procesar las muestras con ADNasa, teniendo en cuenta el ADN residual que no sufrió degradación. Como control para la conservación del ARN, se llevó a cabo simultáneamente la amplificación de las regiones de ARNm del gen de limpieza GapdH. Los valores de ARN del VPH 16 obtenidos se normalizaron a 105 células.
El análisis estadístico de los resultados se realizó de acuerdo con los criterios de Fisher y Spearman.
Resultados y discusión
De 64 pacientes, la forma integrada del ADN del VPH se encontró en 16 pacientes en 21 pacientes (31,8%), de los cuales se encontró una integración del 10% en 100 casos y una integración parcial en 11 casos. En 45 pacientes (68,2%), se detectó ADN del VPH 16 en forma episomal. Este grupo incluye pacientes con ADN del virus puramente episomal y aquellos con un grado muy bajo de su integración, que está más allá de la sensibilidad del método de evaluación del estado físico del VPH. Según las características clínicas y morfológicas, los tumores con ADN de VPH integrado y episomal se distribuyen en proporciones aproximadamente iguales (tabla 1).
